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液相色譜儀常見故障及應(yīng)對措施

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作者:依利特 來源:液相售后 2025-09-28 09:42:17

在有機化合物分析領(lǐng)域,液相色譜儀(HPLC)始終是的核心設(shè)備 —— 它憑借對高沸點、熱不穩(wěn)定及大分子有機化合物的精準檢測能力,成為科研與工業(yè)檢測中的 “得力助手”。

從結(jié)構(gòu)來看,一套完整的HPLC系統(tǒng)由儲液器、高壓泵、進樣器、色譜柱、檢測器和記錄儀等關(guān)鍵部件組成。分析過程其實像一場“精準篩選”:儲液器里的流動相,會在高壓泵的推動下平穩(wěn)進入系統(tǒng);待測樣品通過進樣器“搭乘”流動相,一同進入填充著固定相的色譜柱。由于樣品中不同組分在固定相和流動相之間的分配系數(shù)不一樣,它們會在兩相中反復(fù)經(jīng)歷吸附與解吸附,遷移速度隨之產(chǎn)生明顯差異,終實現(xiàn)高效分離。分離后的組分依次流出色譜柱,經(jīng)檢測器轉(zhuǎn)化為清晰的電信號,再由記錄儀以圖譜形式呈現(xiàn),為后續(xù)分析提供直觀依據(jù)。也正因如此,HPLC在生命科學(xué)研究、食品安全性檢測、藥物研發(fā)試驗和生產(chǎn)質(zhì)控,以及環(huán)境污染物監(jiān)測等多個關(guān)鍵領(lǐng)域,都有著廣泛且重要的應(yīng)用。

作為當前使用頻率高的色譜分析技術(shù)之一,HPLC 的核心組件與氣相色譜有相似之處,但因為流動相是液體,系統(tǒng)設(shè)計上做了不少針對性調(diào)整。比如,輸液泵必須保證流量平穩(wěn)恒定,才能確保分析結(jié)果準確;進樣系統(tǒng)得操作便捷且密封良好,避免樣品泄漏影響數(shù)據(jù);另外,液體流動相粘度比氣體高,為了降低柱壓,HPLC 的色譜柱通常直徑更粗,長度也比氣相色譜柱短不少。這些設(shè)計細節(jié),讓 HPLC 能覆蓋絕大多數(shù)有機化合物的定性與定量分析需求。

實際分析時,樣品溶液注入色譜柱后,會在高壓作用下沿著固定相遷移。不同組分因為與固定相的相互作用力不同,會先后流出色譜柱,檢測器捕捉到這些組分后形成對應(yīng)的峰信號,通過解析峰信號就能清晰判斷樣品的具體組成。雖然 HPLC 的分離原理和經(jīng)典液相色譜一致,但現(xiàn)代 HPLC 融入了高壓輸液泵、高靈敏度檢測器以及微粒固定相等先進技術(shù),大幅提升了分析效率與準確性,尤其適合處理高沸點、大分子以及不同極性范圍的有機化合物,為科研和工業(yè)檢測提供了更可靠的技術(shù)支持。


HPLC 系統(tǒng)核心組成及功能

表1.HPLC 系統(tǒng)核心組成及功能



相關(guān)產(chǎn)品推薦:1、高效液相色譜儀  2、超高效液相色譜儀  3、制備液相色譜儀  4、專用液相色譜儀


液相色譜儀(HPLC)常見故障及實用處理方法

1. 柱壓過高

柱壓過高是 HPLC 使用中常見的問題,多是因為緩沖液中的鹽析出后積聚在柱內(nèi),或是樣品殘留導(dǎo)致色譜柱污染。

若確定是鹽析出,可先用 40~50℃的純水,以低速正向沖洗色譜柱,等柱壓逐漸下降后慢慢提高流速,之后換成常溫純水繼續(xù)沖洗,后用純甲醇沖洗約 30 分鐘,就能有效清除柱內(nèi)積鹽;

要是樣品污染導(dǎo)致的柱壓高,建議用純水反向沖洗色譜柱,接著依次用甲醇、甲醇 - 異丙醇混合液(比例 4:6)、甲醇和純水清洗,后再用純甲醇正向沖洗 30 分鐘,恢復(fù)色譜柱性能。

2. 流動相中出現(xiàn)氣泡

流動相里有氣泡,往往是因為過濾器長期浸泡在乙酸銨等緩沖液中,滋生微生物造成堵塞。處理時可將過濾器浸入5%的硝酸溶液,用超聲清洗幾分鐘;也可以浸泡在5%硝酸溶液12~36小時后,用純水沖洗干凈,然后開啟儀器的purge功能排除氣泡,再打開泄壓閥,用純水沖洗過濾器約1小時,就能解決氣泡問題。

3. 無液流或無壓力顯示

遇到儀器無液流或無壓力顯示的情況,大概率是泵密封墊片磨損,或是泵體內(nèi)進入了大量空氣。

若是密封墊片磨損,直接更換新的墊片即可;

要是泵體內(nèi)有氣泡,可在泵出口處連接 50ml 注射器,通過注射器輔助抽氣,排出泵內(nèi)空氣后就能恢復(fù)正常。

4. 壓力波動或流量不穩(wěn)

壓力波動、流量不穩(wěn),主要是系統(tǒng)中存在空氣,或是單向閥的寶石球與閥座之間有雜質(zhì)導(dǎo)致的。

首先要確保流動相充分脫氣,同時檢查儲液器內(nèi)的液位是否充足,避免空氣進入系統(tǒng);

若懷疑是單向閥問題,可將單向閥拆下,放入丙酮中用超聲清洗,清除雜質(zhì)后重新安裝,就能改善壓力和流量穩(wěn)定性。

5. 峰面積重復(fù)性差

峰面積重復(fù)性差,可能是進樣閥漏液、進樣針未完全到位,或是樣品量不足造成的。

先檢查進樣閥的密封性,若有漏液及時維修或更換部件;

操作時確保進樣針完全插入到位,同時確認樣品溶液的體積符合分析要求,就能提升峰面積的重復(fù)性。

6. 色譜峰分叉或峰形異常

色譜峰出現(xiàn)分叉或峰形異常,常見原因是色譜柱污染或柱頭填料塌陷。

若為色譜柱污染,按照對應(yīng)的清洗流程對色譜柱進行清洗即可;

要是柱頭填料塌陷,需先清除柱頭頂層受損的填料,然后重新填充新的填料,滴加甲醇壓實,后用甲醇沖洗柱頭至潔凈,恢復(fù)色譜柱的分離效果。


HPLC 常見故障及解決方案?

表2.HPLC 常見故障及解決方案?



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